1. 原理
根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型紅細(xì)胞膜上含有A抗原，B型紅細(xì)胞膜上含有B抗原，AB型紅細(xì)胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對(duì)A抗原和B抗原的特異性抗體。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知的抗A、抗B試劑與受檢者的紅細(xì)胞混合時(shí)，與抗A試劑發(fā)生凝集者即為A型，與抗B分型試劑發(fā)生凝集者即為B型，與抗A、抗B試劑均發(fā)生凝集者即為AB型，與抗A、抗B試劑均不凝集者即為O型。所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗－A或/和抗－B.
2. 標(biāo)本采集
2.1 標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。
2.2 標(biāo)本要求：
2.2.1 抗凝劑：如用抗凝血，多主張用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。
2.2.2 用手指末梢血作血型檢測(cè)時(shí)，最少樣品量為100ul，如手指有
凍瘡，則主張采耳垂血。
3. 標(biāo)本儲(chǔ)存：2小時(shí)內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)，室溫放置下不超過8小時(shí)，4℃-8℃
保存不超過48小時(shí)。
4. 標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸
5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本不能作測(cè)定
6. 試劑
6.1 試劑名稱：ABO血型檢測(cè)試劑
6.2 試劑生產(chǎn)廠家：南京華欣藥業(yè)生物工程有限公司
6.3 試劑組成
試劑1：抗A分型試劑（藍(lán)色），效價(jià)1：128，2℃-8℃避光保存，室溫放置不宜過久。
試劑2：抗B分型試劑（黃色），效價(jià)1：128，2℃-8℃避光保存，室溫放置不宜過久。
試劑3：5％A、B及O型紅細(xì)胞鹽水懸液，自制。配制方法：分別采取已知A、 B、O三種血型的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3次，以壓積紅細(xì)胞配成不同濃度的紅細(xì)胞懸液。
紅細(xì)胞懸液的配制
|
懸液濃度（％） |
壓積紅細(xì)胞（滴） |
鹽水（滴） |
|
2 5 10 20 |
1 1 1 1 |
2ml（40） 0.8ml（16） 0.4ml（8） 0.2ml（4） |
為了防止紅細(xì)胞懸液敏感性不一致，可隨機(jī)采取3個(gè)或以上的健康成人血液，按A、B、O型分別混合后，按上法制備。
7. 操作步驟
7.1 玻片法
7.1.1 取清潔玻片1張（或白瓷板1塊），用肥皂水刷洗后晾干，用蠟
筆劃出小格，并注明A、B字樣。將抗A試劑、抗B試劑各一滴分別滴于玻片（或瓷盤）上A、B處。分別取等體積待檢血樣（5％-10％紅細(xì)胞懸液或全血）于抗A試劑和抗B試劑。
7.1.2 另取潔凈玻片1張（或白瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A
細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。
7.1.3 用不同的竹簽將分型試劑與待檢血樣調(diào)勻，同時(shí)不停的搖動(dòng)玻
片（或瓷盤）并觀察血型凝集（或溶血）反應(yīng)。如以玻片做試驗(yàn)時(shí)，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。
7.2 試管法
7.2.1 取潔凈小試管（內(nèi)徑10mm×60mm）2支，分別標(biāo)上A、B字樣，
用滴管分別向A管滴加抗A分型試劑1滴。向B管滴加抗B分型試劑1滴。向A、B管各滴加待檢血樣的5％紅細(xì)胞懸液各1滴，混合。
7.2.2 另取潔凈小試管（內(nèi)徑10mm×60mm）3支，分別標(biāo)明A、B和
O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5％紅細(xì)胞懸液1滴，混合。
7.2.3 搖勻后以1000轉(zhuǎn)/分的速度離心1分鐘判定結(jié)果。將試管輕輕
搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。
8. 結(jié)果判斷
8.1 觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、
B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。
8.2 凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：
4＋＝紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。
3＋＝紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。
2＋＝紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。
1＋＝肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。
±=鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。
MF＝混合凝集外觀是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。
－表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。
8.3 按下表報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABO血型
ABO血型正反定型結(jié)果
|
分型血清＋受檢者紅細(xì)胞 |
受檢者 |
受檢者血清＋試劑紅細(xì)胞 |
||||
|
抗－A ＋ — — ＋ |
抗－B — ＋ — ＋ |
抗－A＋B ＋ ＋ — ＋ |
血型 A B O AB |
A細(xì)胞 — ＋ ＋ — |
B細(xì)胞 ＋ — ＋ — |
O細(xì)胞 — — — — |
9. 臨床意義：輸血、器官移植與親子鑒定
10. 操作性能：快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好。
11 超出范圍結(jié)果處理
11.1 紅細(xì)胞自凝：冷凝集系增高是最為常見原因。應(yīng)用37℃-40℃的
生理鹽水洗滌紅細(xì)胞可去除紅細(xì)胞表面附著的導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集的冷集素。
11.2 正反定型結(jié)果不一致原因
11.2.1 分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗—A血清效價(jià)不高，可
將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。
11.2.2 紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例則不適當(dāng)，使反應(yīng)不明
顯，誤判為陰性反應(yīng)。
11.2.3 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少（如亞型）或抗原性減弱（見于
白血病或惡性腫瘤）以及B類或cisAB等。
11.2.4 受檢者血清中蛋白紊亂（高球蛋白血癥），或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過高，
常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。
11.2.5 受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗—A和抗—B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。
11.2.6 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時(shí)，可
溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。
11.2.7 由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型
不符的原因。
11.2.8 血清中有意外抗體，如自身抗—I，常引起干擾。
11.2.9 老年人血清中抗體水平大幅度下降。
11.3 正反定型結(jié)果不一致的解決方法：
11.3.1 另從受檢者采取1份新鮮血液標(biāo)本，這樣可以糾正因污染或搞
錯(cuò)樣本造成的不符合。
11.3.2 將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成2％鹽水細(xì)胞懸液，用抗—A、抗—B、
抗—AI，抗—A＋B及抗—H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。
11.3.3 對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽性，表示紅細(xì)
胞已被抗體致敏。
11.3.4 用A1、A2、B、O紅細(xì)胞從自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果
懷疑是抗—I，用O型（或ABO相合的）臍血紅細(xì)胞檢查。
11.3.5 如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和
4℃放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。
11.3.6 如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗
—B血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作A、B、H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì)80％HAB分泌型的人有用。
11.3.7 如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴，混合。往
往可使緡錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。
11.3.8 如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別：
11.3.8.1 觀察細(xì)胞與抗—A及抗B的凝集強(qiáng)度，與抗A的反應(yīng)要比抗
—B的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。
11.3.8.2 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗—B不凝集
自身紅細(xì)胞上的類B抗原。
11.3.8.3 檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出A物
質(zhì)而無B物質(zhì)。
11.3.8.4 核對(duì)患者的診斷，類B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭
陰件桿菌感染有關(guān)。
12. 方法局限性
12.1 分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后，應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。
12.2 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。
12.3 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，
以便容易核實(shí)是否漏加血清。
12.4 按理IgM抗—A和抗—B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃為最
強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般仍在室溫（20℃-24℃）內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37℃可使反應(yīng)減弱。
12.5 離心時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性
或假陰性結(jié)果。
12.6 觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。
12.7 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。
12.8 試劑一旦發(fā)現(xiàn)渾濁不得使用。
12.9 制紅細(xì)胞懸液時(shí)防止自凝現(xiàn)象。
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